今天,大學路小編為大家?guī)砹藦V東技師院校哪個好考點 國家公務員筆試地點一般在哪?,希望能幫助到廣大考生和家長,一起來看看吧!
檢驗技師考點:抗血清的保存
(1)經(jīng)簽定合格后的抗血清,以1:100比例加入1%的硫柳汞或5%的疊氮鈉,使其最后濃度分別為0.01%或0.05%.
(2)用無菌滴管將抗血清分裝小管,每管裝1ml左右。
(3)-20℃以下保存,可保存2年以上。
(4)如有條件可將血清冷凍干燥保存于4℃以下,保存時間更久。
制備:
1、動物的選擇
羊、馬、雞、猴、豚鼠,都是常用的免疫動物,在實驗中,選擇動物時應考慮抗原與動物的種屬關系、抗原性質(zhì)與動物種類、免疫血清的需要量、免疫血清的要求以及動物個體等因素。免疫用動物應選適齡、健壯.最好為雄性。最常用的實驗動物是家兔,一般選擇選擇年齡在6個月以上當年繁殖的♂性,體重2 ~3公斤,健康家兔三只,免疫前用金屬編號牌固定兔耳,或用染料涂沫在動物的背部,作出明確的標記。
2、抗原制備
1)抗原稀釋:用滅菌生理鹽水將抗原稀釋為2mg/ml,于免疫前一天加入溶液,使每毫升抗原溶液含青霉素1000 UI,鏈霉素1000 UI,放4℃過夜(一般可不加青、鏈霉素)次日取出,與佐劑混合制成乳劑后用于動物免疫。
免疫原的注射劑量應考慮其抗原性的強弱、分子量大小、動物的個體狀態(tài)和免疫時間。對于純的可溶性抗原的免疫劑量,通常小鼠首次抗原劑量為50~100μg/次,大鼠為100~200μg/次,兔為100μg ~1 mg/次,合成免疫原為2 mg(半抗原約為20~200μg),一般需要與等量的福氏完全佐劑混合。加強免疫的劑量為首次計量的1/2,通常用不完全福氏佐劑或不用佐劑。如需制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法;反之,欲獲得高效價的抗血清,宜采用大劑量抗原長程免疫法。
2)佐劑和抗原乳劑的配制
1佐劑的配制:福氏完全佐劑(Freund’s complete adjuvant),各實驗室的配方不盡相同,我室采用的配方如下:
醫(yī)用液體石臘 20毫升
羊毛脂 12克
水浴溶化、混勻,分裝于青霉素小瓶,用紗布、線繩扎緊瓶塞。8磅20分鐘滅菌,4℃保存?zhèn)溆?。于免疫前準備抗原乳劑制備時,以活卡介苗(有時亦用死卡介苗)代替死結核菌,每毫升試劑中加入10mg活卡,即為福氏完全佐劑。
2抗原乳劑的制備:其方法一般有兩種,其一,將等量的完全佐劑(注意佐劑必須預先加熱融化,但不超過50℃)和抗原溶液分別吸入兩個5ml注射器內(nèi),在兩個注射器的12# 針頭間套上一根長約8~12cm的醫(yī)用無毒塑料管,將兩個注射器連接在一起(塑料管必須先經(jīng)酒精浸泡消毒,使用時取出,用滅菌生理鹽水沖洗后,與注射器針頭相連接,塑料管與針頭的口徑須合適,不能松,稍緊些為宜),針頭*塑料管約1~2cm然后由兩人相對而坐后緩緩推動針蕊,使管內(nèi)溶液進入塑料管道至對側注射器內(nèi),每次推動針蕊時必須把管內(nèi)容物全部推出,另一側也同樣操作,使管內(nèi)液體往返混合,直至形成油包水乳劑(Water-in-oil enulsion)為止。
其二是,將等量的佐劑和抗原溶液倒入缽內(nèi),經(jīng)過反復碾磨,也可形成油包水乳劑,該法主要優(yōu)點是快速,可靠,不足方面主要是由于粘附過多,浪費佐劑及抗原。
制成的乳劑是否形成油包水乳劑直接影響免疫效果,因此,必須進行質(zhì)量檢查,檢查的方法是將制成的乳劑滴一滴在涼水(自來水)表面,質(zhì)量合格的乳劑滴入水面保持滴珠完整而不分散,不合格者進入水面后立即擴散,水面油亦逐漸擴大,這就必須要繼續(xù)操作至質(zhì)量合格為止。
但有時,由于佐劑的配制質(zhì)量原因,很難乳化至合格,遇有這種情況,須考慮重新配制佐劑。
3、免疫途徑,劑量和免疫周期
抗原注射途徑可根據(jù)不同抗原及試驗要求,選用皮內(nèi)、皮下、肌肉、靜脈或淋巴結內(nèi)等不同途徑注入抗原進行免疫。一般常采用背部、足掌·耳后等處皮內(nèi)或皮下多點注射。初次免疫與第二次免疫的間隔時間多為2~4周。常規(guī)免疫方案為抗原加CFA皮下多點注射進行基礎免疫;再以免疫原加IFA作2~5次加強免疫,每次間隔2~3周,皮下或腹腔注射加強免疫。
1)常規(guī)(皮內(nèi)多點注射)免疫:
1第一次免疫:劑量為每只兔子注射1.0 ml抗原乳劑(含抗原量1~2mg)。注射部位為兩只后腳掌的皮內(nèi)各注射0.2 ml,其余0.6 ml分多點注入脊柱二側,頸部,腹股溝和腋窩等處淋巴結附近部位皮內(nèi),每點可注入0.05ml,分12點注入。
2第二次免疫:初次免疫后20天左右,劑量為1.0ml/只(1~2 mg/ml),加福氏不完全佐劑。注射部位在腹部皮下多點注射,每點注入0.1 ml。
3第三次免疫:再次免疫后兩周內(nèi)進行,注射劑量和部位同第二次免疫,免疫后7~14d抽取少許靜脈血,分離血清,試血測定效價。
2)淋巴結免疫:主要優(yōu)點是可減少用量。過程如下:
1卡價苗致敏:免疫前足掌皮下每側各注入活卡價苗(75 mg/ml)0.3 ml。10天左右觀察兩側?N窩淋巴結,一般可腫脹如蠶豆大小,此時即可進行淋巴結內(nèi)免疫注射。
2第一次免疫:用手指定淋巴結后在兩側?N窩淋巴結內(nèi)各注入抗原乳劑0.25ml,每只兔總量0.5 ml;為加強免疫,于初次免疫20天后,于腹部皮下多點注射不加佐劑抗原溶液1mg/1ml。
3二周后可如同第一次免疫的劑量和途徑再注射一次,一般可在第三次免疫注射前試血滴定效價,效價如已達到要求可不必進行第三次免疫。
有條件的.情況下,免疫后要加強動物飼料管理,如給熟黃豆飼養(yǎng)等。
3)腹腔免疫:一般不必加佐劑,適用于細胞性或顆粒性抗原,而且抗原性較強者,例如用綿羊紅細胞免疫家兔或小鼠即可用此法。
4、試血,測定抗體效價
一般在第三次免疫后7~10天即可于兔耳靜脈或小鼠尾尖取少量血,分離出血清之后進行試血。
① 環(huán)狀試驗,較為經(jīng)典的方法,目前較少采用,如與20μg/ml以下的抗原于30 min內(nèi)能出現(xiàn)“艸”的沉淀環(huán),即測定抗體效價達1:5000以上時為合格。
② 免疫雙擴散法,這是最常用的試血方法,其具體方法是,中間孔加稀釋的抗原(1mg/ml)10μl,周圍孔順時針方向加制備的抗血清分別為1:2, 1:4, 1:8,1:16,1:32和1:64,(用生理鹽水或PBS稀釋)。經(jīng)37℃保溫24h后觀察結果,效價在1:16以上即可決定放血。
5、放血
經(jīng)效價檢查合格后即可放血。放血前動物應停食12 h,以減少血清中的脂肪含量。如擬保留該免疫動物,可直接由心臟取血,或切開耳緣靜脈滴血或心臟穿刺取血。取血后由靜脈緩緩注入等量5%葡萄溶液以補足失血量。取血的動物經(jīng)2~3個月休息,可再次加強免疫后取血。如擬一次放血致死,可用頸動脈放血的方法,各種取血方法如下。
1)心臟取血:固定動物于仰臥位置,用食指探明心臟博動量高部位(在胸骨左側,由下向上數(shù)第3與第4助骨之間,指兔),剪去少許毛,用2.5% 碘酒和75%酒精消毒后,以9#針頭在預定位置與胸部呈45。角刺入心臟,微微上下移動針頭,待見血液進入針筒后,即將注射器位置固定取血。2.5公斤體重的家兔一次可取血20~30ml。
2)耳緣靜脈滴血:先將耳緣靜脈附近的毛剪去用無菌棉球將皮膚擦干凈(不用酒精消毒,避免溶血)。用臺燈照射耳部使血管因溫度增高而擴張,然后用無菌刀片將耳緣靜脈切一長0.5cm的縱切口,第一次切口應從耳尖部開始,以后再切時,逐步向耳根方向移動。用無菌試管或平皿收集流出的血液。如切口凝血,血流不暢時,可用無菌棉棒輕輕將切口外血凝塊擦去(注意勿使切口損傷太大),血流仍可繼續(xù)流出,直至達到所需要的血量為止。取血后用無菌棉球壓迫切口止血。耳緣靜脈取血一次可取血50ml左右而動物不死。
3)頸動脈放血:使動物仰臥固定四肢,頸部剪毛、消毒后縱向切開前頸部皮膚長約10cm,用止血鉗將皮膚分開夾住,剝離皮下組織,露出肌層,用刀柄加以分離,即見搏動的頸動脈。小心將頸動脈和迷走神經(jīng)剝離長約5cm,選擇血管中段,用止血鉗夾住血管壁周圍的筋膜。遠心端用絲線結扎,近心端用動脈鉗夾住,用酒精棉花球消毒血管周圍,用無菌剪刀剪一V形缺口。取長2.5cm、直徑為1.6mm塑料管一段,將一端剪成針頭樣斜面,并將此端插入頸動脈中,另一端放入200ml無菌三角瓶內(nèi),然后放開止血鉗,血即流入三角瓶內(nèi),動物流血至死,2.5公斤家兔可放血80~100ml。
6、分離血清
必須在無菌條件下進行,待收集于平皿或三角瓶內(nèi)的血液凝固之后,用無菌滴管在無菌環(huán)境(例如超凈工作臺)中把血塊與瓶壁剝離后,放入37℃,1~2h取出后放入4℃過夜,使血清充分析出(不能冰凍,否則產(chǎn)生溶血),經(jīng)離心沉淀分出血清,放進低溫冰箱保存。使用前必須經(jīng)過簽定合格后再分裝保存?zhèn)溆谩?
;【導讀】作為初級檢驗技師,其需要掌握的基礎技能及知識要點就是采血方法及其各項方法之間的區(qū)別,出現(xiàn)頻率較大的就是靜脈采血法與皮膚采血法的區(qū)別是什么?為了幫助各位考生更好的了解此項知識點,助力檢驗職稱考生復習,小編今天為大家整理級檢驗技師基礎考點之采血方法,內(nèi)容如下:
靜脈采血:多采用位于體表的淺靜脈,通常采用肘部靜脈、手背靜脈、內(nèi)踝靜脈或股靜脈。
皮膚采血法:曾稱為毛細血管采血法,是采集微動脈、微靜脈和毛細血管的混合血,同時含細胞間質(zhì)和細胞內(nèi)液。
皮膚采血缺點是易于溶血、凝血、混入組織液,而且局部皮膚揉擦、*深度不一、個體皮膚厚度差異等都影響檢查結果,所以,皮膚采血檢查結果重復性差、準確性不好。
靜脈采血的操作環(huán)節(jié)多、難于規(guī)范統(tǒng)一,在移液和丟棄注射器時可能造成血液污染。靜脈采血有利于樣本收集運送和保存,防止院內(nèi)血源性傳染病。
以上就是小編今天給大家整理分享的關于“初級檢驗技師基礎考點之采血方法”的相關內(nèi)容,希望對各位考生有所幫助。至于檢驗初級師多久考中級這個問題,小編認為,一關一關過,先把初級檢驗技師過了再說。
檢驗技師/士考點:尿蛋白定性試驗方法
尿蛋白定性尿蛋白定性實驗是尿常規(guī)檢查中必做的一項實驗,是診斷腎臟疾病和病變的重要常規(guī)指標之一。尿蛋白定性試驗常通過半定量方式或加號方式檢測尿液中排出的蛋白質(zhì)的.多少,用于判斷和了解腎臟功能是否出現(xiàn)問題及問題的嚴重性,其結果可用陰性、微量、1--4個加號表示,也可用數(shù)值表示,加號越多或數(shù)值越高則尿蛋白越多。
1.試帶法
利用pH指示劑的蛋白誤差原理。本法對清蛋白較敏感,對球蛋白不敏感,僅為清蛋白的1/100~1/50,且可漏檢本周蛋白。尿液pH增高可產(chǎn)生假陽性。本法快速、簡便、易于標準化,適于健康普查或臨床篩檢。
2.加熱乙酸法
為傳統(tǒng)的經(jīng)典方法,特異性強、干擾因素少。能同時檢出清蛋白及球蛋白尿,但敏感度較低,一般在0.15g/L左右。本法能使含造影劑尿液變清,可用于鑒別試驗。
3.磺基水楊酸法
又稱磺柳酸法。操作簡便、反應靈敏、結果顯示快,與清蛋白、球蛋白、糖蛋白和本周蛋白等均能發(fā)生反應;敏感度高達0.05~0.1g/L,因而有一定的假陽性。被NCCLS作為干化學法檢查尿蛋白的參考方法,并推薦為檢查尿蛋白的確證試驗。
;2017年檢驗技師考試《免疫檢驗》重要考點匯總
免疫檢驗是臨床檢驗技師考試的科目之一。你知道臨床檢驗技師考試免疫學檢驗都考哪些知識嗎?下面是我為大家代碼的免疫檢驗科目考試重點匯總,歡迎閱讀。
免疫檢驗科目考試重點匯總
0、免疫學檢測技術的基礎是抗原抗體反應。
1、免疫:是機體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能
2、免疫防御(對外);免疫自穩(wěn)(防自身免疫病);免疫監(jiān)視(防腫瘤)。
3、中樞免疫器官:骨髓、胸腺;外周免疫器官:淋巴結、脾臟(最大)、黏膜相關淋巴組織
4、B細胞:通過識別膜免疫球蛋白來結合抗原,介導體液免疫;B細胞受體=BCR=mIg
表面標志:膜免疫球蛋白(SmIg)、Fc受體、補體受體、EB病毒受體和小鼠紅細胞受體。
成熟B細胞:CD19、CD20、CD21、CD22 (成熟B細胞的mIg主要為mIgM和mIgD)同時檢測CD5分子,可分為B1細胞和B2細胞。
B細胞功能檢測方法:溶血空斑形成試驗(體液免疫功能)。
5、T細胞:介導細胞免疫。共同表面標志是CD3(多鏈糖蛋白);輔助T細胞的標志是CD4;殺傷T細胞的標志是CD8;T細胞受體=TCR。
T細胞和NK細胞的共同表面標志是CD2(綿羊紅細胞受體);
CD3+CD4+CD8- = 輔助性T細胞(Th)
CD3+CD4-CD8+ = 細胞毒性T細胞(Tc或CTL)(T細胞介導的細胞毒試驗)
CD4+CD25+ = 調(diào)節(jié)性T細胞(Tr或Treg)
T細胞功能檢測:植物血凝素(PHA)刀豆素(CONA)*T細胞增殖。增殖試驗有:形態(tài)法、核素法。
T細胞亞群的分離:親和板結合分離法,磁性微球分離法,熒光激活細胞分離儀分離法
*E花環(huán)試驗是通過檢測SRBC受體而對T細胞進行計數(shù)的一種試驗;
6、NK細胞:具有細胞介導的細胞毒作用。直接殺傷靶細胞(腫瘤細胞和病毒感染的細胞)
表面標志:CD16(ADCC)、CD56。
測定人NK細胞活性的靶細胞多用K562細胞株,而測定小鼠NK細胞活性則常采用YAC-1細胞株。
7、吞噬細胞包括:單核-吞噬細胞系統(tǒng)(MPS,表面標志CD14,包括骨髓內(nèi)的前單核細胞、外周血中的單核細胞和組織內(nèi)的巨噬細胞)和中性粒細胞。(表達MHCⅡ類分子)
8、人成熟樹突狀細胞(DC)(專職抗原呈遞功能):表面標志為CD1a、CD11c和CD83。
9、免疫球蛋白可分為分泌型(sIg,主要存在于體液中,具有抗體功能)及膜型(mIg,作為抗原受體表達于B細胞表面,稱為膜表面免疫球蛋白)
10、免疫球蛋白按含量多少排序:IgG>IgA>IgM>IgD>IgE五類(按重鏈恒定區(qū)抗原性(CH)排序)
免疫球蛋白含量測定:單向環(huán)狀免疫擴散法、免疫比濁法。
11、免疫球蛋白的同種型抗原決定簇位于恒定區(qū)(CH、CL)
12、抗體由漿細胞產(chǎn)生??贵w分子上VH和VL(高變區(qū))是抗原結合部位。
13、IgG:血清中含量最高的免疫球蛋白(IgG1最高),血液和細胞外液中的主要抗體。也是再次免疫應答的主要抗體,是唯一能通過胎盤的抗體,大多數(shù)抗菌抗體、抗病毒抗體是IgG,某些自身抗體及超敏Ⅱ型抗體是IgG,免疫學檢測中第二抗體也以IgG為主。
14、IgA:分血清型(單體存在)及分泌型;分泌型IgA(sIgA)為二聚體,性能穩(wěn)定,主要存在于胃腸道、支氣管分泌液、初乳、唾液、淚液中,局部濃度高,是參與黏膜局部免疫的主要抗體。
15、IgM:為五聚體,主要存在于血液中,是Ig中分子量最大的(又稱巨球蛋白)。個體發(fā)育最早合成和分泌的抗體??乖?后體液免疫應答中最先產(chǎn)生的抗體,感染過程中血清IgM水平升高,說明近期感染。新生兒臍血中若IgM增高,提示有宮內(nèi)感染。
16、IgE:為單體結構,正常人血清中含量最低。IgE為親細胞抗體,介導Ⅰ型超敏反應。特異性過敏反應和寄生蟲早期感染患者血清中可升高。
17、補體:具有酶樣活性的球蛋白(肝細胞、巨噬細胞產(chǎn)生);激活途徑主要有三種:經(jīng)典途徑(以結合抗原后的IgG或IgM類抗體為主要激活劑(雙鏈DNA),C1~C9全部參與)、替代途徑(病原微生物細胞壁成分(脂多糖)直接激活補體C3,然后完成C5~C9的激活過程)、MBL途徑(由急性炎癥期產(chǎn)生的甘露糖結合凝集素(MBL)與病原體結合后啟動激活)。
18、補體系統(tǒng)中C3含量最多,C2含量最少。
19、滅活:加熱56℃30分鐘,補體喪失活性
20、補體清除免疫復合物的方式:吞噬調(diào)理;免疫粘附;免疫復合物抑制。
21、完全抗原=反應原性+免疫原性。半抗原=反應原性(無免疫原性)
22、抗原抗體結合力(分子間引力):靜電吸引、范德華力、氫鍵、疏水作用力(最強)
23、抗原抗體反應的四大特點:特異性、可逆性、比例性、階段性;受反應條件(如溫度、pH、電解質(zhì)、抗原抗體比例等)的影響。
24、抗體過量——前帶;抗原過量——后帶(鉤狀效應)
25、抗原抗體反應可分為兩個階段:第一階段為抗原與抗體發(fā)生特異性結合的階段,此階段反應快,僅需幾秒至幾分鐘,但不出現(xiàn)可見反應;第二階段為可見反應階段,此階段反應慢,往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時。
26、顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應??扇苄钥乖霈F(xiàn)沉淀反應。單價抗原與相應抗體結合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。
27、木瓜酶水解IgG為2Fab+Fc;胃蛋白酶水解IgG為F(ab)2+nFc。
28、最常用于免疫動物的佐劑是弗氏佐劑,弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑(弗氏不完全佐劑加卡介苗)和弗氏不完全佐劑兩種。
29、R(兔子)型抗血清是用家兔及其他動物免疫產(chǎn)生的抗體,抗原抗體反應比例合適范圍較寬,適于作診斷試劑。
H(馬)型抗血清是用馬等大動物免疫獲得的抗體,抗原抗體反應比例合適范圍較窄,一般用作免疫治療。
30、抗血清常見保存條件:2-8℃保存;冷凍保存(最常用);真空干燥保存(5-10年)。
31、雜交瘤細胞放入液氮(-196℃)前,需要逐步降溫。復蘇細胞時,從液氮罐內(nèi)取出凍存管,立即浸入37℃水浴。
32、凝集反應分為兩個階段:①抗原抗體的特異性結合;②出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。
33、直接凝集反應的原理是細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原,在適當?shù)碾娊赓|(zhì)(0.85%氯化鈉)參與下可直接與相應抗體結合出現(xiàn)凝集??乖?凝集原,抗體=凝集素。
34、玻片凝集試驗:主要用于抗原的定性分析,AB0血型的測定。
試管凝集試驗:肥達氏試驗、外斐試驗、輸血交叉配血試驗;
35、紅細胞包被抗原,用以檢測抗體的血凝反應,稱為正向間接血凝反應(PHA)。
紅細胞包被抗體,用以檢測抗原的血凝反應,稱為反向間接血凝反應(RPHA)。
36、間接血凝抑制試驗:可用于檢測抗體、自身抗體、變態(tài)反應性抗體,也可測定抗原。
37、金黃色葡萄球菌A蛋白(SPA)
38、血凝試驗可在微量滴定板或試管中進行,將標本倍比稀釋,一般為1:64,同時設不含標本的稀釋液為對照孔。凡紅細胞沉積于孔底,集中呈一圓點的為不凝集。如紅細胞凝集,則分布于孔底周圍。
39、明膠凝集試驗(間接):HIV-1抗體和抗*抗體檢測
40、抗球蛋白試驗,又稱Coombs試驗,是檢測抗紅細胞不完全抗體的一種很有用的方法。包括直接Coombs試驗(檢測紅細胞上的不完全抗體)和間接Coombs試驗(游離在血清中的不完全抗體)
41、沉淀反應分兩個階段:第一階段為抗原抗體發(fā)生特異性結合,幾秒到幾十秒即可完成,出現(xiàn)可溶性小的復合物,肉眼不可見。第二階段為形成可見的免疫復合物,約需幾十分鐘到數(shù)小時才能完成,如沉淀線、沉淀環(huán)。
42、免疫比濁:最適pH為6.5~8.5,磷酸鹽緩沖液。
43、對流免疫電泳:抗體流向負極,抗原流向正極
44、免疫固定電泳也用予尿液中本-周蛋白的檢測及κ、λ分型,腦脊液中寡克隆蛋白的檢測及分型。
45、RIA(放免)核素(125Ⅰ)標記抗原,競爭抑制(標記抗原和非標記抗原競爭*抗體);IRMA(免疫放射)核素標記抗體,非競爭結合(過量標記抗體,反應速率比RIA快,靈敏度明顯高于RIA。)
RIA可以測定大分子和小分子抗原,但IRMA則只能測定至少有兩個抗原決定簇的抗原。
46、常用的熒光素有:異硫氰酸(FITC)黃綠色,最常用;四乙基羅丹明(RB200)橘紅色;四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)橙紅色;藻紅蛋白(R-RE)橙色。其他:銪(Eu3+)
47、熒光標記蛋白的常用方法:攪拌法和透析法。
熒光抗體效價鑒定:抗原含量為1g/L時,抗體效價>1:16
48、時間分辨熒光免疫測定(TRFIA)以鑭系元素(如:銪)化合物為熒光標記物。
49、偏振免疫測定的偏振波長是485nm(藍光)。
50、辣根過氧化物酶(HRP):底物(1)鄰苯二胺(OPD),(2)四甲基聯(lián)苯胺(TMB) ELISA中應用最廣泛的底物。
堿性磷酸酶(ALP):底物:對-硝基苯磷酸脂(p-NPP)
β-半乳糖苷酶(β-Gal):底物:4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷(4-MUU)
51、異相法:先分離,后測定;均相法:不分離,直接測。
52、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA):
必要的試劑:①固相的抗原或抗體;②酶標記的抗原或抗體;③酶反應的底物。
抗原測定:蛋白大分子抗原用得最多的是雙抗體夾心法(HBsAg)。只有單個抗原決定簇的小分子,則使用競爭抑制法。
抗體測定:通常使用間接法(HCV、HIV)、雙抗原夾心法(HBsAb)、競爭法(HBcAb、HBeAb)和捕獲法(IgM)等
*待測孔最后顯示的顏色深淺與標本中的待測抗原或抗體呈正相關的是:雙抗體夾心法、雙位點一步法、間接法測抗體;
53、化學發(fā)光底物有:直接化學發(fā)光劑:吖啶酯和三聯(lián)吡啶釕;酶促反應發(fā)光劑:(標記酶HRP)魯米諾及其衍生物、(標記酶為堿性磷酸酶)AMPPD;
54、免疫印跡實驗中常選用多克隆抗體。
55、外周血單個核細胞的分離的分層液常用:Ficoll(由上到下為血漿,單個核細胞,粒,紅)和Percoll(由上至下:死細胞,單個核細胞,淋,紅,粒)。
56、純淋巴細胞群的采集有:黏附貼壁法,吸附柱過濾法,磁鐵吸引法,Percoll分離液法。
57、T細胞和B細胞的分離:E花環(huán)沉降法,尼龍毛柱分離法
58、淋巴細胞活力測定:臺盼藍染色法,死細胞為藍色。
59、CD4是HIV受體,HIV感染時CD4/CD8比值明顯降低。
60、CD4/CD8升高常見于自身免疫性疾病;而CD4/CD8降低常見于病毒感染、惡性腫瘤和再生障礙性貧血等。
61、(ELISA)雙抗體夾心法是用于細胞因子測定的最常用方法。
62、流式細胞儀:前向散射光(FS)反映顆粒的大小。側向散射光(SS)反映顆粒內(nèi)部結構復雜程度、表面的光滑程度。熒光(FL)反映顆粒被染上熒光部分數(shù)量的多少。
63、免疫熒光標記最常用的熒光染料:異硫氰酸熒光素(FITC)亮綠色熒光。德州紅紅色熒光。藻膽蛋白類橙色至紅色熒光。
64、臨床上常用三色熒光抗體標記將CD3-CD16+CD56+淋巴細胞確定為NK細胞。
65、AIDS患者的一個特征性免疫診斷指標表現(xiàn)為:T淋巴細胞總數(shù)減少,T細胞亞群CD4Th/CD8Tc比例倒置,Th/Tc<1.0,Th細胞數(shù)量顯著下降甚至測不出,而Tc細胞數(shù)量可正?;蛟黾?,NK細胞減少或活力下降,B淋巴細胞群則處于正常范圍。
65、強直性脊柱炎——HLA-B27
66、SLE患者以IgG、IgA升高較多見。類風濕關節(jié)炎患者以IgM增高為主。
67、M蛋白(MP)是B淋巴細胞或漿細胞單克隆異常增殖(>30g/L)所產(chǎn)生的一種在氨基酸組成及順序上十分均一的異常單克隆免疫球蛋白。多無免疫活性,故又稱副蛋白。臨床上多見于多發(fā)性骨髓瘤、高丙種球蛋白血癥、惡性淋巴瘤、重鏈病、輕鏈病等
68、M蛋白-最基本方法:血清蛋白區(qū)帶電泳技術
M蛋白-粗篩試驗:血清免疫球蛋白定量(單向瓊脂免疫擴散法和免疫比濁法)
M蛋白-鑒定,首選方法:免疫固定電泳(IFE)技術(區(qū)帶電泳技術與特異性抗血清的免疫沉淀反應相結合)是臨床最常用的方法。
69、IgD降低見于原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、矽肺
70、CSF中的濃度:IgG>IgA>IgM。神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤時,以IgA和IgM升高為主。
(感染、血管病變、系統(tǒng)性疾病=IgG升高)
71、本-周蛋白即尿中游離的免疫球蛋白輕鏈。尿中可測得,血中呈陰性(原因是本-周蛋白分子量小,極易迅速自腎臟排出,血中含量并不升高)
72、冷球蛋白又稱冷免疫球蛋白,在-4℃時發(fā)生沉淀,于37℃時又復溶解。采血是冷球蛋白檢測的`關鍵,宜在體溫條件下采集和保存靜脈血。
73、補體結合試驗(CFT),梅毒的診斷,華氏反應。
74、非均相熒光免疫測定:時間分辨熒光免疫測定法。
均相熒光免疫測定:熒光偏振免疫測定法。
75、鏈球菌感染:ASO(膠乳凝集試驗、免疫散射比濁法)
76、傷寒沙門菌有菌體(O)抗原、鞭毛(H)抗原和表面(Vi)抗原。肥達反應,效價≥1:80為陽性
77、卡氏肺孢菌,又稱卡氏肺孢子蟲,為類真菌。
78、Ⅰ型超敏反應:由特異性IgE抗體介導產(chǎn)生,其發(fā)生速度最快。(青霉素、支氣管哮喘)
提高Th1細胞活性,減少IL-4的分泌,可降低IgE的產(chǎn)生,阻斷IgE介導的Ⅰ型超敏反應。
參與Ⅰ型超敏反應:肥大細胞、嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞。
79、Ⅱ型超敏反應:又稱細胞毒型或細胞溶解型超敏反應,它是由靶細胞表面的抗原與相應IgG或IgM類抗體結合后,在補體(細胞溶解)、巨噬細胞(吞噬)和NK細胞(ADCC作用)參與下,引起的以細胞溶解或組織損傷為主的病理性免疫反應。(輸血反應、新生兒溶血癥、自身免疫性溶血性貧血、藥物過敏性血細胞減少癥、肺出血腎炎綜合征、甲狀腺功能亢進)
80、Ⅲ型超敏反應:由可溶性免疫復合物沉積于局部或全身多處毛細血管基底膜,通過激活補體,并在血小板、嗜堿性粒細胞、中性粒細胞等的參與下,引起的以充血水腫、局部壞死和中性粒細胞浸潤為主要特征的炎癥反應和組織損傷。(Arthus反應、類Arthus反應、血清病、鏈球菌感染后腎小球腎炎、類風濕關節(jié)炎、SLE)/81、Ⅳ型超敏反應:又稱遲發(fā)型超敏反應(DTH),是效應T細胞與特異性抗原結合后,引起的以單個核細胞浸潤和組織損傷為主要特征的炎癥反應。(細胞免疫)效應性CD4+Th1細胞識別抗原后活化,可釋放IFN-γ、TNF、淋巴毒素(LT)、IL-3、GM-CSF、單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)等多種細胞因子。
常見Ⅳ型超敏反應性疾?。焊腥拘赃t發(fā)型超敏反應(結核分枝桿菌、病毒、原蟲)、接觸性皮炎、移植排斥反應。(結核菌素皮試、斑貼試驗)
82、變性的IgG可*機體產(chǎn)生抗變性IgG抗體(類風濕因子)
83、ITP患者血清中存在有抗血小板抗體,該抗體可以縮短血小板的壽命。
84、抗乙酰膽堿受體抗體:對重癥肌無力(MG)具有診斷意義。
85、毒性彌漫性甲狀腺腫患者血清中有抗促甲狀腺激素受體(TSHR)的IgG型自身抗體。(甲狀腺功能的亢進)
86、多發(fā)性肌炎是以損害肌肉為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病,如果同時有皮膚損害,則稱為皮肌炎。
87、75%的PSS患者有抗核抗體陽性,抗Scl-70抗體是PSS的特異性抗體,80%~95%的局限性硬皮病患者抗著絲點抗體陽性。
88、自身免疫病(AID)的特征:高滴度自身抗體,病理特點為免疫炎癥損傷與抗原分布一致,能建動物模型。
89、抗DNP抗體(抗*白抗體)通常完全被DNA和組蛋白吸收,是形成狼瘡細胞的因子。
90、ANA陽性的熒光現(xiàn)象分:核膜型、均質(zhì)型、斑點型、核仁型。ANA常為自身免疫病的初篩試驗。
91、ENA是可提取核抗原的總稱,分子中不含DNA。
92、抗dsDNA抗體對SLE有較高的特異性??筍m抗體也是SLE的特異性標志之一。此兩項常為SLE確診指標。(對疑為SLE的患者,應先進行ANA和抗dsDNA抗體的檢測,當ANA和(或)抗dsDNA抗體陽性時,再作抗ENA抗體譜的檢測。如有抗Sm抗體和(或)抗RNP抗體陽性,可實驗室診斷為SLE)
93、抗核RNP抗體:為MCTD(混合性結締組織病)的診斷指標。
94、抗SSA/抗SSB抗體:為干燥綜合征(SS)的診斷指標。(當ANA陽性而抗dsDNA抗體陰性,抗ENA抗體譜中抗SsA抗體和(或)抗ssB抗體陽性,可實驗室診斷為干燥綜合征。)
95、抗Jo-1抗體:多發(fā)性肌炎(PM)患者常為陽性。
96、抗Scl-70抗體:進行性系統(tǒng)性硬皮癥(PSS)的診斷指標。
97、NCA:原發(fā)性小血管炎的特異性血清標志物
98、內(nèi)風濕性關節(jié)炎(RA):自身抗體有RF、抗角蛋白抗體(AKA)、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體(anti-CCP)。
99、Farr法測定dsDNA抗體的特異性高,為公認標準法,當抗dsDNA抗體結合率大于20%時對SLE有意義。
100、抗線粒體抗體(AMA):原發(fā)性膽汁性肝硬化
101、巨球蛋白血癥:以分泌IgM的漿細胞惡性增殖為病理基礎的疾病。好發(fā)于老年男性,主要表現(xiàn)骨髓外浸潤,以肝、脾和淋巴結腫大為主要體征并伴有血黏滯過高綜合征,如表現(xiàn)為視網(wǎng)膜出血。(血清呈膠凍狀難以分離,電泳時血清有時難以泳動,集中于原點是該病的電泳特征)
102、異常免疫球蛋白檢測的應用原則
初篩實驗:區(qū)帶電泳分析、免疫球蛋白定量檢測和尿本-周蛋白定性檢測。
確證實驗:免疫電泳、免疫固定電泳、免疫球蛋白亞型、血清及尿中輕鏈蛋白的定量檢測。
103、HIV誘導的免疫應答
1.體液免疫應答HIV感染后,機體可產(chǎn)生:中和抗體、抗P24殼蛋白抗體、抗gp120和抗gp41抗體
2.細胞免疫應答:CD8+T細胞應答、CD4+T細胞應答。
104、HIV抗原檢測:核心抗原p24(ELISA)
105、免疫印跡法判斷標準為:①HIV抗體陽性:至少有兩條膜帶(gp41/gp120/gp160)或至少一條膜帶與p24帶同時出現(xiàn);②HIV抗體陰性:無HIV抗體特異性條帶出現(xiàn);③HIV抗體可疑:出現(xiàn)HIV特異性條帶,但帶型不足以確認陽性者。
CD4+T細胞計數(shù)是反映HIV感染患者免疫系統(tǒng)損害狀態(tài)的最明確指標。當CD4+T細胞低于500/μl,則易機會性感染;低于200/μl,則發(fā)生AIDS。
106、CEA大于60μg/L時可見于結腸、胃、肺癌。手術6周后CEA水平正常。
107、AFP——原發(fā)性肝癌。PSA——前列腺癌
108、糖類抗原有:CA125:上皮性卵巢癌和*內(nèi)膜癌;CA15-3:乳腺癌;CA19-9:胰腺癌、結直腸癌。
109、神經(jīng)母細胞瘤和小細胞肺癌(基因有P53,RB)的標志物:神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)
110、排斥反應有:宿主抗移植反應(HVGR)和移植物抗宿主反應(GVHR)。
111、移植物存活與HLA配型的關系是:①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位點數(shù)越多,移植物存活幾率越高;②供、受者HLA-DR位點相配更重要,因為HLA-DR和HLA-DQ基因有很強的連鎖不平衡,DR位點相配的個體,通常DQ位點也相配;③不同地區(qū)HLA匹配程度與移植結果的關系有著不同的預測價值。
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